HPLC ve HPTLC arasındaki temel fark, HPLC, bir örnekteki bileşenlerin kantitatif olarak ayrılmasına izin verirken, HPTLC, bir örnekteki bileşenlerin kantitatif olarak ayrılmasına izin vermez.
Kromatografi, bir karışımdaki bileşenleri ayırmak ve tanımlamak için kullanılan fiziksel bir ayırma yöntemidir. Hem HPLC hem de HPTLC, kromatografik tekniklerdir. HPLC yüksek performanslı sıvı kromatografisidir. HPTLC yüksek performanslı ince tabaka kromatografisidir.
1. Genel Bakış ve Temel Fark
2. HPLC nedir
3. HPTLC nedir
4. Yan Yana Karşılaştırma - Tablo Şeklinde HPLC ve HPTLC
5. Özet
HPLC yüksek performanslı sıvı kromatografisi. Bir karışımdaki bileşenleri ayırmak, tanımlamak ve ölçmek için kullanılan analitik bir tekniktir. Bu teknikte, numune uygun bir çözücü içinde çözülür. Daha sonra numuneli solvent, belirli bir basınçta bir pompadan geçirilir. Pompa katı adsorban malzeme ile doldurulur. Daha sonra bazı bileşenler emici malzemeye güçlü bir şekilde bağlanırken, diğer bileşenler gevşek bir şekilde bağlanır. Bu, bileşenlerin pompadan farklı akış hızlarına sahip olmasına neden olur. Bu nedenle, bileşenler kolayca ayrılabilir.
Şekil 01: Bir HPLC Sistemi
Pompayı dolduran adsorban malzeme, durağan faz. Çözünmüş numuneye sahip çözücü, mobil faz olarak bilinir. Bu teknikte kullanılan pompaya sütun denir. Kolon bir adsorban malzeme, en yaygın olarak silika parçacıkları ile doldurulur. Bu parçacıkların boyutu 2-50 μm arasında değişebilir. Ayırma işlemi, mobil fazın bileşiminden ve sistemin sıcaklığından etkilenir. Sabit faz ile numunedeki bileşen arasındaki etkileşimler hidrofobik etkileşimler, dipol-dipol etkileşimleri, iyonik bağlanma, vb. Olabilir..
HPLC'nin çalışma basıncı, geleneksel sıvı kromatografisinden çok daha yüksektir. 50-350 bar civarındadır. Sıvı kromatografisi ve HPLC arasındaki fark, sıvı kromatografisinde numunenin yerçekimi altındaki kolondan düşmesi, HPLC'de ise numunenin kolondan basınçlandırılmasıdır. Kolonun ve emici parçacıkların boyutu da geleneksel sıvı kromatografisine kıyasla çok küçüktür. Ancak, HPLC tekniği ile verilen çözünürlük üstündür.
HPTLC: yüksek performanslı ince tabaka kromatografisi. Geleneksel TLC'nin gelişmiş ve otomatik şeklidir. Bu teknik kısa sürede etkili bir çözünürlük sağlar. Bu analiz yönteminde, numune ve bir referans aynı zamanda analiz edilebilir, bu da numunenin referans ile karşılaştırılmasını sağlar. Diğer kromatografik tekniklerden daha gelişmiş analitik doğruluk sağlar. Analiz için harcanan zaman daha azdır. Teknik, düşük maliyetli bir tekniktir.
Şekil 02: Gıda Boyalarının HPTLC Kullanılarak Analizi
HPTLC yöntemi basit bir işlemdir ve numune hazırlama aşaması da elimine edilir (Geleneksel TLC'de, numune hazırlama aşaması ayrılmadan önce dahil edilir. Bu aşama temizlik ve zenginleştirmeyi içerir). Diğer kromatografik tekniklerin gazdan arındırma, filtrasyon vb. Ön işlemlerini gerektirmesine rağmen, çözücü doğrudan herhangi bir ön işlem yapılmadan kullanılabilir..
HPTLC'de kullanılan adsorban malzeme, çok küçük partikül boyutlarına sahip silikadır. Geleneksel TLC'de, silis parçacık boyutu 5-20 μm, HPTLC'de ise 4-8 μm'dir. Numune, bir aplikatör kullanılarak HPTLC plakasına uygulanır. Düzgün ve güvenli bir uygulama sağlar. Daha sonra plakalar hareketli faza sahip bir odaya yerleştirilir. Oda, mobil fazın buharı ile doyurulmalıdır. HPTLC işleminden sonra, hareket eden lekeler tespit edilebilir. Plakadaki lekeleri tespit ederken, HPTLC tekniği uygun bir UV bölgesi veya bir iyot odası kullanır.
HPLC ve HPTLC | |
HPLC yüksek performanslı sıvı kromatografisidir. | HPTLC yüksek performanslı ince tabaka kromatografisidir. |
teknik | |
HPLC'de, çözücü ile mobil faz, sabit faz ile doldurulmuş bir kolondan geçirilir. | HPTLC'de, numune bir TLC plakası üzerinde tespit edilir ve mobil fazı içeren bir bölmenin içine yerleştirilir; daha sonra numunenin hareketli faz ile birlikte plakayı yukarı doğru hareket etmesine izin verilir. |
Ölçüm | |
HPLC'de, kolondaki bileşenlerin akış hızları arasındaki farklar numunedeki bileşenleri ayırmak için kullanılır. | HPTLC'de, numunedeki her bir bileşen tarafından kat edilen mesafeler arasındaki farklar, numunedeki bileşenleri ayırmak için kullanılır. |
Nicel Ayırma | |
HPLC, bir numunedeki bileşenlerin kantitatif olarak ayrılmasına izin verir. | HPTLC, bir örnekteki bileşenlerin kantitatif olarak ayrılmasına izin vermez. |
HPLC ve HPTLC iki kromatografik tekniktir. HPLC ve HPTLC arasındaki temel fark, HPLC'nin bir numunedeki bileşenlerin kantitatif olarak ayrılmasına izin verirken, HPTLC'nin bir örnekteki bileşenlerin kantitatif olarak ayrılmasına izin vermemesidir..
1. “Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi.” Vikipedi, Wikimedia Foundation, 10 Nisan 2018, Burada mevcut.
2. “HPTLC.” LinkedIn SlideShare, 30 Mayıs 2011, Burada mevcut.
1. “HPTLCplatetoMS” Kjaergaard tarafından İngilizce Wikipedia - en.wikipedia'dan Commons Wikimedia üzerinden Commons'a (Public Domain) transfer
2. PD tarafından “Hplc” Dr. rer. nat. habil. Gertrud Morlock Doçent (Privatdozentin) Hohenheim Üniversitesi Gıda Kimyası Enstitüsü - G. Morlock, C. Oellig, CAMAG Bibliyografya Servisi 103 (2009) Commons Wikimedia üzerinden