Sıcak ve Soğuk Tripsinizasyon Arasındaki Fark

Temel Fark - Sıcak vs Soğuk trypsinization

Sıcak ve Soğuk Tripsinizasyon, hayvan hücre kültüründe hücrelerin enzimatik ayrıştırılmasında kullanılan iki yöntemdir. temel fark sıcak ve soğuk tripsinizasyon arasında, isminden de anlaşılacağı gibi, tripsin hücresel ayrıştırma için eklendiği sıcaklığa bağlıdır. Sıcak tripsinizasyon daha yüksek sıcaklık koşullarında gerçekleşir (36.5 - 37 ⁰C) soğuk tripsinizasyon düşük sıcaklık koşullarında gerçekleşir.

Hayvan hücrelerinin primer hücre kültürü sürecinde, kullanılan üç ana yöntem vardır ve başarılı oldukları kanıtlanmıştır. Üç yöntem, hücrelerin mekanik ayrıştırılması, hücrelerin enzimatik ayrıştırılması ve birincil eksplant tekniğidir. Hücrelerin izolasyonuna yol açan hücrelerin enzimatik ayrıştırılması ve protein parçalayıcı enzim tripsin ile yapılır. Bu nedenle, bu işlem Tripsinizasyon olarak bilinir. Tripsinizasyon, Sıcak Tripsinizasyon ve Soğuk Tripsinizasyon olmak üzere iki farklı koşulda yapılabilir. Sıcak tripsinizasyon, hücrelerin tripsin ile sıcak koşullar altında 36.5 - 37 sıcaklıkta tedavi edilmesine yönelik yöntemdir. ⁰C. Soğuk tripsinizasyon, soğuk koşullar altında, tercihen çok düşük sıcaklıkları koruyan buzda gerçekleşen tripsin tedavisi sürecidir..

İÇİNDEKİLER

1. Genel Bakış ve Temel Fark
2. Sıcak Tripsinizasyon Nedir?
3. Soğuk Tripsinizasyon Nedir?
4. Sıcak ve Soğuk Tripsinizasyon Arasındaki Benzerlikler
5. Yan Yana Karşılaştırma - Tablo Şeklinde Sıcak ve Soğuk Tripsinizasyon
6. Özet

Sıcak Tripsinizasyon Nedir??

Bir birincil hücre kültürü üretmek için hücreleri izole etmek amacıyla hücresel bileşenleri ayrıştırmak için tripsinizasyon yapılabilir. Tripsin, bir protein yıkım enzimidir ve tripsinizasyonda kullanılan enzim karışımı, ham bir özüt veya saflaştırılmış bir ürün olabilir. Ham ekstraktın diğer parçalayıcı enzimleri içerdiğinden protein parçalanması ve hücre parçalanmasında daha etkili olduğu söylenir..

Sıcak tripsinizasyon, daha yüksek sıcaklık koşullarında meydana gelen hücre ayrıştırması için en yaygın kullanılan enzimatik yöntemdir. Tripsinizasyon ile tedaviden önce, istenen doku daha küçük parçalar halinde doğranır. Kolay ayrıştırma sürecini kolaylaştırır. Kıyılmış doku daha sonra Diseksiyon Bazal Tuz ortamı olarak bilinen özel bir ortamda yıkanır.

Yıkama aşamasının tamamlanmasından sonra, hücreler, tripsin olan aktif enzimi içeren bir şişeye dönüştürülür. Bu teknik sıcak bir tripsinizasyon protokolü gerektirdiğinden, tripsin yaklaşık 37 ° C'lik bir sıcaklığa yerleştirilir ⁰C yaklaşık dört saat.

Şekil 01: Tripsin

İçerikler, protokol kolaylığı ve ayrıştırma işlemini hızlandırmak için santrifüjleme yöntemleri kullanılarak karıştırılır ve çalkalanır. Önerilen süre elde edildiğinde, hücreler süpernatanttan türetilebilir. Süpernatanttan türetilen hücreler daha sonra belirli bir sıcaklık ve zamanda inkübe edilir.

Soğuk Tripsinizasyon Nedir??

Soğuk tripsinizasyon, soğuk koşullar altında gerçekleşen diğer tripsinizasyon tipidir. Bu teknikte, kesilen ve yıkanan hücreler buz üzerindeki şişelere yerleştirilir ve daha sonra tripsin ile ıslatılır. Islatma süresi çok daha uzundur - yaklaşık 6-24 saat.

Islatma prosedürünün tamamlanmasından sonra, tripsin hücre lizatından çıkarılır ve doku parçaları 37 ° C'de daha inkübe edilir.⁰C, yaklaşık 20-30 dakika boyunca. Hücrelerin ayrıştırılması, doku karışımının tekrar pipetlenmesi ile gerçekleştirilir. Bu, hücrelerin zardan ayrılmasına ve süpernatana gelmesine izin verecektir. Hücreler süpernatant içine girdikten sonra, inkübe edilir ve istenen sıcaklıkta ve sürede büyütülür..

Soğuk tripsinizasyon yönteminin birkaç avantajı vardır

Hücre hasarı olarak daha yüksek canlı hücre verimi en aza indirilir. Santrifüjleme adımları kullanılmadan hücre hasarı en aza indirilir.
Son derece uygun yöntem.
Daha az zahmetli.

Soğuk tripsinizasyon yönteminin ana sınırlaması, tek seferde büyük miktarların kullanılamamasıdır.

Sıcak ve Soğuk Tripsinizasyon Arasındaki Benzerlikler Nelerdir??

Hem Sıcak hem de Soğuk Tripsinizasyon süreçlerinde hücrelerin ayrıştırılması için tripsin enzimi kullanılır.
Hem Sıcak hem de Soğuk Tripsinizasyon süreçleri, hücrelerin ayrıştırılması için hücre kültürü prosedürlerinde kullanılır.
Hem Sıcak hem de Soğuk Tripsinizasyon tedavi prosedürlerinde, hücreler süpernatanttan türetilir.

Sıcak ve Soğuk Tripsinizasyon Arasındaki Fark Nedir?

Sıcak ve Soğuk Tripsinizasyon
Sıcak tripsinizasyon, hücrelerin tripsin ile sıcak koşullar altında 36.5 - 37 sıcaklıkta tedavi edilmesine yönelik yöntemdir. ⁰.	Soğuk tripsinizasyon, daha soğuk koşullar altında, tercihen çok düşük sıcaklıkları muhafaza eden buzda gerçekleşen tripsin tedavisi sürecidir..
Protokol
Kıyılmış doku parçaları 37 ° C'de tutulur ⁰C prosedür boyunca sürekli.	Kıyılmış doku parçaları başlangıçta buz gibi sıcaklıklarda tutulur ve daha sonra 37 ° C'de tutulur. ⁰.
Sıcaklık
Sıcak tripsinizasyon 36.5 - 37'de gerçekleşir ⁰	Buz soğuk sıcaklıklarında soğuk tripsinizasyon meydana gelir.
Tüketilen zaman
Tüm işlem için (yaklaşık 4 saat) sıcak tripsinizasyon için daha az zaman gerekir.	Soğuk tripsinizasyon için daha uzun süre gerekir (yaklaşık 6-24 saat).
Canlı Hücrelerin Verimi
Sıcak tripsinizasyonda düşük.	Soğuk tripsinizasyonda yüksek.
Santrifüj Kullanımı
Sıcak tripsinizasyonda hücrelerin ayrıştırılması için santrifüjleme gereklidir.	Soğuk tripsinizasyonda santrifüjleme gerekli değildir.
Tripsinizasyon için İlk Doku Miktarı
Sıcak tripsinizasyonda daha fazla miktarda doku kullanılabilir.	Soğuk tripsinizasyonda daha az miktarda doku kullanılabilir.
Hücre Hasarı
Sıcak tripsinizasyonda santrifüj nedeniyle yüksek.	Soğuk tripsinizasyon nedeniyle daha az.

özet - Sıcak vs Soğuk trypsinization

Tripsinizasyon, hücre kültürleme işlemi sırasında birincil hücre kültürlerinin ayrıştırılması ve hazırlanması için protein parçalayıcı enzim tripsin kullanma yöntemidir. Prosedür sırasında kullanılan sıcaklıklara bağlı olarak iki ana tripsinizasyon tekniği vardır. Sıcak ve soğuk tripsinizasyondur. Sıcak tripsinizasyon 37 ° C'de gerçekleştirilir. ⁰C ise soğuk tripsinizasyon buz gibi soğuk koşullar altında gerçekleştirilir. Soğuk tripsinizasyonun tamamlanması daha uzun sürse de, daha yüksek canlı hücre verimi olduğu söylenir. Bunun nedeni, kuvvetli santrifüjleme aşamalarını kullanmadığı için soğuk tripsinizasyonda hücre hasarının en aza indirilmesidir. Bu sıcak ve soğuk tripsinizasyon arasındaki farktır.

Referans:

1. “Tripsinizasyonu.” Trypsinization - Genel Bakış | ScienceDirect Konuları. Burada mevcut
2. “Birincil Hücre Kültürü: 3 Teknik (Diyagramlı).” Biyoloji Tartışması, 16 Ekim 2015. Buradan ulaşabilirsiniz

Görünüm inceliği:

1. 'Aktif siteyi denemek' Fdardel tarafından - Commons Wikimedia üzerinden kendi çalışması, (CC BY-SA 3.0)

Bilim ve Doğa