RT-PCR ve QPCR Arasındaki Fark

Ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR)

RT-PCR ve QPCR karşılaştırması

Biyoteknolojideki ilerlemeler, yıllar boyunca organ nakli talepleriyle başa çıkmanın çeşitli yollarının keşfedilmesine yol açmıştır. Daha önce, ihtiyaç duyulan bir hastaya ölümden hemen sonra herhangi bir organı gönüllü olarak bağışlayacak olan bir kişi, sadece nakil operasyonuna hızlı bir başlangıç ​​yapabilirdi. Biyologların sürekli çalışmaları ve araştırmaları kök hücrelerin keşfedilmesine yol açar.

Kök hücreler, temel olarak DNA'nın alındığı organın bir klonu olacak hücrelerin yenilenmesi için kaynak görevi görecek olan bir embriyonun DNA'sından alınanları ifade eder. İnsan hakları aktivistleri bu tür prosedürlerin durdurulması için lobi yaparken, başarılı operasyonlar gerçekten de organ nakillerindeki kök hücre gelişmelerinin etkinliğini kanıtlamıştır..

Bununla birlikte, kök hücreleri takdir edip tam olarak anlayabilmek için, bu bilimsel keşifle ilişkili farklı terminolojilere aşina olmak gerekir. Kök hücre kültürü DNA ve kodlaması ile ilgilidir. Bu nedenle, öğrencilerin veya alanla ilgilenen kişilerin RT-PCR ile qPCR arasında ayrım yapması hayati önem taşır..

Ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR), polimeraz zincir reaksiyonu veya PCR'nin birçok varyantından biridir. Bu laboratuvar tekniği, bilim insanlarının “amplifikasyon” olarak adlandırılan bir işlemle belirli bir DNA dizisinin çoklu kopyalarını üretmeleri için moleküler biyolojide yaygın olarak kullanılmaktadır. RT-PCR ve geleneksel PCR arasındaki fark, RNA'nın ilk önce ters transkriptaz kullanan DNA komplemanına tersine kopyalanmasıdır. Ters çevrilmiş transkripsiyonu içeren yeni tamamlayıcı DNA daha sonra geleneksel PCR veya gerçek zamanlı PCR kullanılarak amplifiye edilecektir..

Bu süreci inceleyen öğrencilerin çoğu, ikisi de benzer şekilde kısaltıldığından, ters transkripsiyon PCR ve gerçek zamanlı PCR'yi değiştirme hatasını yapar. Karışıklığı önlemek için biyologlar gerçek zamanlı PCR'yi kantitatif gerçek zamanlı PCR veya qPCR olarak etiketler.

QPCR, amplifikasyonu meydana geldiğinde ölçmekten sorumlu olduğu için RT-PCR'den büyük ölçüde farklıdır. RT-PCR'nin amplifikasyon sürecini başlattığı söylenebilir, qPCR ise prosedür gerçekleştikçe bunu ölçer.

Nicel Gerçek Zamanlı PCR

QPCR, DNA ve RNA'nın ölçülmesi söz konusu olduğunda geleneksel tek yönlü yaklaşım yönteminde devrim yaratmıştır, çünkü qPCR yönteminin uygulanması, biyologların reaksiyon sonuçları gözlemlenmeden önce bile çekirdeklerin asidinin başlangıç ​​konsantrasyonunu belirlemelerini mümkün kılar ve not düştü.

Günümüzde genetik çalışmalar için en güçlü ve hassas analiz tekniği olarak kabul edilen qPCR'nin uygulaması önemli ölçüde genişlemiştir. Şu anda RNA parazit ölçümleriyle birlikte kantitatif gen ekspresyon analizi, genotipleme, patojen tespiti ve SNP analizine katılmaktadır..

QPCR sıklıkla gözlemlenen ve denenen doku hücrelerinde bulunan haberci RNA ve MicroRNA'yı ölçmek için ters transkripsiyon işlemi ile birleştirilir. Bu daha sonra ikisi arasında bir başka görünür fark verir: RT-PCR, amplifikasyon işlemi için kullanılabilir, ancak niceleme amacıyla qPCR ile kaynaştırılması gerekir.

QPCR'nin ayrıca, veriler PCR'nin üstel büyüme (log) fazı ilerledikçe toplanabildiği için daha nicel olduğu bilinmektedir. Biyologlar, PCR yan ürününün miktarının qPCR yoluyla ölçülecek şablon nükleik asit miktarı ile doğru orantılı olduğunu not eder..

Öte yandan, RT-PCR, konsantrasyonun ayarlanan standardını izleyen bir jel üzerindeki amplifiye bandın yoğunluğunun gözlenmesi, "yarı kantitatif" çıkarımın oluşmasına neden olabileceğinden, niceliksel bir yapıya sahip olmaktan uzaktır..

Özet:

1.QPCR ve RT-PCR, biyoteknolojide kullanılan ve DNA'nın çoklu kopyalarının üretimi için kullanılan terimlerdir..
2.RT-PCR, DNA kodunun ters transkripsiyonunu yükseltmek için kullanılır; QPCR amplifikasyonu ölçer.
3.RT-PCR amplifikasyon içindir, qPCR kantifikasyon içindir.
4.QPCR, kantitatiftir, RT-PCR ise.