Doğrudan ve Dolaylı ELISA Arasındaki Fark

Temel Fark - Doğrudan ve Dolaylı ELISA
 

Enzim immünoassay olarak da bilinen enzime bağlı bir immünoanaliz (ELISA), kandaki antikorları tespit eden serolojik bir testtir.. Hastanın belirli bir virüs türüne veya başka bir bulaşıcı maddeye (antijen) maruz kalıp kalmadığını ve vücudun enfeksiyona karşı antikor üretip üretmediğini bulmak için teşhis aracı olarak kullanılır. ELISA ayrıca geçmiş ve mevcut enfeksiyonları tanımlayabilir. Bu nedenle, ELISA genellikle hastalıkların derinlemesine analiz edilmesinden önce doktorlar tarafından bir ön tarama testi olarak kullanılır. Bu test, hastadan kan örneği alınarak laboratuvarda yapılabilir. İki tip ELISA testi vardır: doğrudan ELISA ve dolaylı ELISA. Doğrudan ve dolaylı ELISA arasındaki temel fark, dolaylı ELISA daha hassastır ve ikincil bir antikorun eklenmesini gerektirir süre doğrudan ELISA daha az hassastır ve sadece birincil antikor kullanır.

İÇİNDEKİLER
1. Genel Bakış ve Temel Fark
2. Doğrudan ELISA nedir
3. Dolaylı ELISA nedir
4. Yan Yana Karşılaştırma - Doğrudan ve Dolaylı ELISA
5. Özet

Doğrudan ELISA nedir?

ELISA, kandaki belirli antijenlerin veya antikorların varlığını tanımlamak için yapılan bir hastalık tanı testidir. Bir plaka deneyi olarak yapılır. Kolayca analiz edilen enzimlerle bağlantılı antikorlar kullanır. Antijenlerin serum örneğindeki varlığı, enzimlerle bağlantılı spesifik antikorlarla bağlanır. Son aşamada, enzimle reaksiyona girmek için spesifik bir substrat eklenir. Enzim, substratı renkli veya sinyal üreten bir ürüne dönüştürür. Kimyasal substrattaki renk değişimi, serum örneğinde belirli bir antikorun varlığını ortaya çıkarır. Doğrudan ELISA testi sadece enzime bağlı bir birincil antikor kullanır. Antijene bağlandığında, rengi hızla değiştirerek kandaki enfeksiyöz ajanın varlığını gösterir. Bununla birlikte, epitoplar antijenlerin bağlanması ile sınırlı olduğu için doğrudan ELISA'da sinyallerin yoğunluğu daha zayıftır. Dolayısıyla, doğrudan ELISA dolaylı ELISA'ya kıyasla daha az duyarlıdır.

Şekil 01: Doğrudan ELISA Testi

Dolaylı ELISA nedir?

ELISA iki tip antikor kullanılarak gerçekleştirilebilir; birincil antikor ve ikincil antikor. Dolaylı ELISA aracı, sinyalleri daha iyi tespit etmek için yükseltmek için her iki antikor tipini de kullanır. Dolaylı ELISA tekniği aşağıdaki gibi yapılır.

1. Plakalar antijenlerle inkübe edilir ve spesifik olmayan bağlanmayı engellemek için yıkanır.
2. Daha sonra birincil antikorlar eklenir ve yıkanır.
3. Enzime bağlı ikincil antikor eklenir ve yıkanır.
4. Bir substrat eklenir ve enzimlerle reaksiyona girmesine izin verilir.
5. Sinyaller tespit edilir ve örnekteki spesifik antijenin varlığı veya yokluğu tanımlanır.

Dolaylı ELISA testinde, birkaç ikincil antikor tek bir birincil antikora bağlanabilir. İkincil antikorlar kolayca analiz edilen enzimlerle bağlantılıdır. Bu nedenle, bir bağlanma, birden fazla etkileşim nedeniyle güçlü bir sinyal verebilir. Dolayısıyla dolaylı ELISA, doğrudan ELISA'dan daha duyarlıdır. Bununla birlikte, dolaylı ELISA, sekonder antikorların çapraz reaksiyonları nedeniyle spesifik olmayan sinyaller yapabilir.

Şekil 02: Dolaylı ELISA Testi

Doğrudan ve Dolaylı ELISA arasındaki fark nedir?

Doğrudan ve Dolaylı ELISA
Doğrudan ELISA, dolaylı ELISA'ya kıyasla daha az duyarlıdır.	Dolaylı ELISA daha hassastır.
Geçen süre
Doğrudan ELISA testi hızlı bir işlemdir.	Dolaylı ELISA zaman alıcıdır.
Antikorların Kullanımı
Doğrudan ELISA'da sadece bir tip antikor (Birincil antikorlar) kullanılır.	Birincil ve ikincil antikorlar dolaylı ELISA için kullanılır.
Enzimler ile bağlantı
Birincil antikorlar enzimlerle bağlantılıdır.	İkincil antikorlar enzimlerle bağlantılıdır.
İkinci Antikorların Çapraz Reaktivitesi
Doğrudan ELISA, ikinci antikorların çapraz reaktivitesini ortadan kaldırır.	Dolaylı ELISA, ikinci antikorların çapraz reaktivitesinden etkilenir.
Sinyaller
Sinyaller dolaylı ELISA'ya göre zayıf.	Sinyaller dolaylı ELISA'da çoğaltılır. Bu nedenle, tespit edilmesi kolaydır.

Özet - Direct vs Dolaylı ELISA

ELISA, bir hastanın kan örneğinde bir antikor veya bir antijenin varlığını tespit etmek için esas olarak immünolojide kullanılan biyokimyasal bir tekniktir. Doğrudan veya dolaylı ELISA olarak bilinen iki işlem ile gerçekleştirilebilir. Doğrudan ELISA testi, antijeni saptamak için sadece birincil antikorları kullanırken, dolaylı ELISA hem birincil hem de ikincil antikorları kullanır. Doğrudan ELISA'da birincil antikorlar etiketlenirken, dolaylı ELISA'da ikincil antikorlar etiketlenir. Doğrudan ve dolaylı ELISA arasındaki fark budur..

Referanslar
1. ”Enzime bağlı immünosorban analizi (ELISA).” Dünya Sağlık Örgütü Bülteni. ABD Ulusal Tıp Kütüphanesi, 1976. Web. 29 Mart 2017
2. Loon, A.M van, J.T Van Der Logt, F. W. Heessen ve J. Van Der Veen. “Toksoplazmozda immünoglobulin M ve A antikorlarının tespiti için etiketli antijeni kullanan enzime bağlı immünosorban testi: dolaylı immünofloresan ve çift sandviç enzime bağlı immünosorban testiyle karşılaştırma.” Klinik Mikrobiyoloji Dergisi. ABD Ulusal Tıp Kütüphanesi, Haziran 1983. Web. 29 Mart 2017

Görünüm inceliği:
1. “ELISA diyagramı” Cavitri tarafından - Commons Wikimedia üzerinden kendi çalışması (CC BY 3.0) 
2. “Dolaylı ELISA” Cawang tarafından - Commons Wikimedia üzerinden kendi çalışması (CC0)