İmmünofloresan ve İmmünohistokimya Arasındaki Fark

Anahtar Fark - İmmünofloresan ve İmmünohistokimya
 

Moleküler biyolojik yöntemler kullanan hastalık teşhisi, klinik laboratuvar teknolojisinin yükselen bir alanı haline gelmiştir. Bir organizmada DNA, RNA veya eksprese edilmiş proteinleri analiz ederek bir hastalığı tanımlamak ve bir hastalığın nedenini anlamak için tüm testleri ve yöntemleri içerir. Moleküler teşhis alanındaki hızlı ilerlemeler bulaşıcı ve bulaşıcı olmayan hastalıklar hakkında temel araştırmalara olanak sağlamıştır. Bunlar, hastalığa katılan önemli genlerde veya proteinlerde sekans veya ekspresyon seviyelerindeki değişiklikleri belirlemek için kullanılır. İmmünofloresan (IF) ve İmmünohistokimya (IHC) kanser biyolojisinde yaygın olarak kullanılan iki tekniktir. IF, monoklonal ve poliklonal antikorları analiz etmek için bir floresan saptama yönteminin kullanıldığı bir IHC türüdür; IHC ise monoklonal ve poliklonal antikorları tespit etmek için kimyasal bazlı yöntemler kullanır. IF ve IHC arasındaki temel fark budur.

İÇİNDEKİLER

1. Genel Bakış ve Temel Fark
2. İmmünofloresan nedir 
3. İmmünohistokimya nedir
4. İmmünofloresan ve İmmünohistokimya Arasındaki Benzerlikler
5. Yan Yana Karşılaştırma - Tablo Şeklinde İmmünofloresan ve İmmünohistokimya
6. Özet

İmmünofloresan (IF) nedir?

İmmünofloresan, analizde kullanılan antikorların, tespit amacıyla floresan boyalar veya floresan proteinler kullanılarak etiketlendiği bir tespit tekniğidir. Etiketli ikincil antikorlar istenmeyen arka plan sinyallerine neden olabilir; bu nedenle IF tekniği, tespit sırasında istenmeyen sinyalleri önlemek için şu anda birincil antikorun kendisini etiketlemeye dayanır. Bu teknik sayesinde, primer ve sekonder antikor arasında spesifik olmayan bağlanma önlenir ve sekonder inkübasyon aşaması olmadığından daha hızlıdır. Veri kalitesi de artırıldı.

Şekil 01: BrdU, NeuN ve GFAP için çift immünofloresan boyama

Florokromlar veya flüoresan boyalar, radyasyonu, tercihen uyarılmış ultraviyole radyasyonu emebilen bileşiklerdir. Parçacıklar uyarılmış durumdan zemin durumuna ulaştığında, bir spektrum oluşturmak için bir dedektör tarafından yakalanan ve tespit edilen radyasyon yayarlar. Floresan etiketin belirli reaksiyon için uyumlu ve stabil olması büyük önem taşımaktadır ve doğru sonuçlar elde etmek için antikora uygun şekilde konjüge edilmesi gerekir. En çok kullanılan florokromlardan biri, sırasıyla 490 nm ve 520 nm absorpsiyon ve emisyon tepe dalga boylarına sahip, yeşil renkte olan floresein izotiyosiyanattır (FITC). IF'de kullanılan bir başka ajan olan rodamin, kırmızı renktedir ve 553 nm ve 627 nm'lik farklı absorpsiyon ve emisyon tepe dalga boylarına sahiptir..

İmmünohistokimya (IHC) nedir?

IHC, hedef hücrede antijenin varlığını tanımlamak ve doğrulamak için uygulanan bir moleküler test yöntemidir. Hedef hücre, enfeksiyöz bir partikül, mikrobiyal bir patojen veya habis bir tümör hücresi olabilir. IHC, hedef hücrelerin hücre yüzeyinde bulunan antijenlerin varlığını belirlemek için monoklonal ve poliklonal antikorları kullanır. Teknik, antijen-antikor bağlanmasına dayanır. Belirli antijenin varlığını veya yokluğunu tespit etmek için bu antikorlara bir tespit markörü konjüge edilir. Bu markerler, enzimler, floresan etiketli antikorlar veya radyo etiketli antikorlar gibi kimyasal markörler olabilir..

Şekil 02: İmmünohistokimya ile boyanmış fare-beyin dilimi

IHC'nin en popüler uygulaması, malign tümörlerin varlığını tanımlamak için kanser hücresi biyolojisidir, ancak bulaşıcı hastalıkların tespiti için de kullanılır.

İmmünofloresan ve İmmünohistokimya Arasındaki Benzerlikler Nelerdir??

• İmmünofloresan ve İmmünohistokimya in vitro koşullarda gerçekleşir.
• Her iki teknik de antijen antikoruna dayanmaktadır
• Her ikisi de çok hızlı teknikler.
• Tekniklerin sonuçları tekrarlanabilir.
• Her ikisinin de geliştirilmiş veri kalitesi var.
• Kanser ve bulaşıcı hastalıkların teşhisinde kullanılan bu teknikler.

İmmünofloresan ve İmmünohistokimya Arasındaki Fark Nedir??

İmmünofloresan ve İmmünohistokimya
IF, deneyde kullanılan antikorların, tespit için floresan boyalar veya floresan proteinler kullanılarak etiketlendiği bir tespit tekniğidir..	IHC, deneyde kullanılan antikorların, tespit için kimyasallar veya radyoaktif elementler kullanılarak etiketlendiği bir tespit tekniğidir.
doğruluk
IF tekniğinde doğruluk IHC'ye göre daha yüksektir.	ESK'da doğruluk daha düşüktür.
Özgünlük
IF daha spesifik.	ESK daha az spesifiktir.

Özet - İmmünofloresan vs İmmünohistokimya

Moleküler mekanizmalar, tıp alanında, diyagnostik alanında devrimler getiren gelişmiş moleküler test yöntemlerine yol açan birçok değişiklik getirmiştir. Bu icatlar, hastalığın hızlı ve doğru bir şekilde tanımlanmasına ve onaylanmasına, böylece ilaçların başarılı bir şekilde uygulanmasına ve üretilmesine olanak sağlamıştır. Bu teknikler, ilaçların hedeflerini bulmak ve ilaç metabolizması sırasında ilacın farmakokinetik özelliklerini doğrulamak için farmakolojide de kullanılır. IF ve IHC, antijen ve antikor bağlanması kavramına dayanan iki teşhis yöntemidir, ancak her iki teknikte de tespit şekli farklıdır. IF, antijeni tespit etmek için floresans prensibini kullanır ve IHC, antijeni tespit etmek için kimyasal konjugasyon kavramını kullanır. IF ve IHC arasındaki fark budur.

Immünofloresan vs İmmünohistokimya PDF sürümünü indirin

Bu makalenin PDF sürümünü indirebilir ve alıntı notuna göre çevrimdışı amaçlar için kullanabilirsiniz. PDF versiyonunu buradan indirebilirsiniz. İmmünofloresan ve İmmünohistokimya Arasındaki Fark.

Referanslar:

1. Aoki, Valéria ve diğ. “Doğrudan ve dolaylı immünofloresan.” Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, Buradan ulaşabilirsiniz. Erişim tarihi: 25 Ağu 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha ve ark. “İmmünohistokimya uygulamaları.” Eczacılık ve Biyolojik Bilimler Dergisi, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, Ağustos 2012, Buradan ulaşabilirsiniz. Erişim tarihi: 25 Ağu 2017.

Görünüm inceliği:

1. “BrdU, NeuN ve GFAP için çift immünofloresan boyama” Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2., Liu X. - Dönüştürücü büyüme faktörünün burun içinden iletimi- inmeden sonra farelerde beta1 enfarktüs hacmini azaltır ve subventriküler bölgede nörogenezi arttırır; Commons Wikimedia üzerinden PMID 19077183 (CC BY 2.0)
2. “ABC-İmmünohistokimya ile boyanmış bir fare dokusunun hipotalamusu” Yazar: zabbn - Commons Wikimedia üzerinden kendi çalışması (CC BY-SA 3.0)