Nitroselüloz ve PVDF Arasındaki Fark

Temel Fark - Nitroselüloz ve PVDF
 

Western blotting, bir protein numunesinden spesifik proteinlerin saptanmasına ve ölçülmesine izin veren bir yöntemdir. Tekniğin güvenilirliği, proteinlerin jelden emilmesi için doğru bir zarın seçilmesine bağlıdır. Farklı tipte mikro gözenekli membranlar vardır. Nitroselüloz ve PVDF membranlar, diğer membran tiplerine göre özel nitelikleri nedeniyle araştırmacılar tarafından tercih edilen iki zardır. Nitroselüloz veya PVDF arasındaki seçim de batı beneklenmesinde karşılaşılan diğer bir zorluktur. Hem nitroselüloz hem de PVDF, yüksek bir protein emme kapasitesine sahiptir. Nitroselüloz ve PVDF membran arasındaki en önemli fark nitroselüloz membranlar antikorları ayırma ve antikorun yeniden çoğaltılması için membranı yeniden kullanma yeteneğine sahip değildir, PVDF membranları sıyırma ve yeniden kullanma kabiliyetine sahiptir.

İÇİNDEKİLER
1. Genel Bakış ve Temel Fark
2. Nitroselüloz nedir
3. PVDF nedir
4. Yan Yana Karşılaştırma - Nitroselüloz vs PVDF
5. Özet

Nitroselüloz Nedir?

Nitroselüloz, selülozun nitrik asit ile işlenmesiyle üretilen bir polimerdir ve moleküler biyolojide, özellikle güney, kuzey ve batı lekeleme gibi kurutma teknikleri için mikro gözenekli membranlar yapmak için kullanılır. Gözenek boyutları nitroselüloz membranlar 3 ila 20 um arasında değişir. Nitroselüloz mikro gözenekli membranlar, membran yüzeyinde meydana gelen immünokimyasal reaksiyonun saptanmasını kolaylaştırır. Bu nedenle, nitroselüloz membranlar sıklıkla proteinlerin hareketsizleştirilmesi ve batı lekelenmesinde spesifik proteinlerin saptanması için kullanılır. Nitroselüloz membranlar ayrıca glikoproteinleri ve nükleik asitleri hareketsiz hale getirebilir.

Nitroselüloz membranlar, çeşitli özelliklerden ötürü yanal akış deneylerinde tercih edilir. Nitroselüloz membranlar proteinleri yüksek konsantrasyonda emer. Membranı ıslatmak için kullanılan çözücü, nitroselüloz membran protein emilimini azaltmaz. Nitroselüloz membranlar istenen jel boyutuna kolayca kesilebilir ve proteinleri jelden membrana elektrik veya kılcal transfer ile aktarabilir. Nitroselüloz, yüksek bağlanma potansiyeline sahip zarlardan proteinlerin daha hızlı akmasına izin verir. Nitroselüloz, gelişmiş bir taşıma gücü gösterir. Nitroselüloz membranın bir başka özel özelliği, çözücü olmayan suya dayanıklı yapıştırıcılar ile çeşitli plastik desteklere kolayca yapıştırılabilmesidir..

Resim 01: Batı beneklenmesi için nitroselüloz membran

PVDF nedir?

Poliviniliden diflorür (PVDF), viniliden diflorürün polimerizasyonu ile üretilen floropolimerdir ve proteinlerin yüksek bir immobilizasyon kabiliyetine sahiptir. Bu nedenle, PVDF'den yapılan mikro gözenekli membranlar, batı lekeleme tekniklerinde, protein karışımlarından spesifik proteinleri analiz etmek için kullanılır. PVDF membranları amino asit analizi ve protein dizilemesi için de kullanılabilir. PVDF membranının nitroselüloz membran üzerindeki en önemli özelliği, antikorlardan kolayca sıyrılabilmesi ve sonraki antikor probları için tekrar kullanılabilmesidir..

PVDF membranları nitroselüloz membranlardan daha kalındır; bu nedenle, yeniden kullanım sırasında hasarlara daha dayanıklıdır. PVDF membranları oldukça hidrofobiktir. Bu nedenle, kullanımdan önce metanol veya izopropanol içine batırılmalıdır..

Nitroselüloz ve PVDF arasındaki fark nedir?

Nitroselüloz ve PVDF
Nitroselüloz, selülozdan oluşan bir polimerdir.	PVDF, viniliden diflorürün polimerizasyonu ile üretilen bir floropolimerdir.
Membran Gözenek Boyutu
Tipik gözenek boyutları 0.1, 0.2 veya 0.45μ'dir	Tipik gözenek boyutları 0.1, 0.2 veya 0.45μm'dir
Protein Bağlama Kapasitesi
Nitroselüloz 80 ila 100 μg / cm protein bağlama kapasitesine sahiptir2.	PVDF'nin 170 ila 200 μg / cm protein bağlama kapasitesi vardır2.
Duyarlılık
PVDF'ye kıyasla düşük hassasiyete sahiptir..	Bu yüksek bir hassasiyete sahiptir.
Az İfade Edilen Proteinlerin Saptanması
Nitroselüloz membranlarda hassasiyet düşük olduğundan, düşük eksprese edilen proteinlerin tespiti için uygun değildir.	Bu, yüksek duyarlılığı nedeniyle az ifade edilen proteinlerin tespiti için daha uygundur.
Arkaplan gürültüsü
Arka plan gürültüsü daha düşük	Arka plan gürültüsü daha yüksek.
Proteinlerle Etkileşimler
Protein molekülleri hidrofobik etkileşimler yoluyla nitroselüloz membranlara bağlanır.	Proteinler hidrofobik ve dipol etkileşimleri ile PVDF membranlarına bağlanır.
Membranın Doğası
Nitroselüloz kırılgandır ve kırılgandır. Bununla birlikte, nitroselüloz versiyonları mevcuttur ve dirençlidir.	PVDF daha dayanıklıdır ve daha yüksek kimyasal dirence sahiptir.
Strip ve Tekrar Kullanabilme
Nitroselüloz sinyali kaybetmeden sıyırma ve yeniden kopyalamada zorluk yaşayabilir.	PVDF, yeniden kopyalama ve sıralama uygulamaları için idealdir.
uygunluk
Nitroselüloz düşük moleküler ağırlıklı proteinleri tespit etmek için idealdir.	PVDF, daha yüksek moleküler ağırlıklı proteinleri tespit etmek için daha uygundur.
Diğer kullanımlar
Nitroselüloz nükleik asit analizi ve nokta / yarık kurutma için kullanılabilir.	PVDF protein dizilemesi ve katı faz tahlil sistemleri için kullanılabilir.
Maliyet
Bu PVDF membranlardan daha ucuzdur.	Bu nitroselüloz membranlardan daha pahalıdır.
Ön ıslatma ihtiyacı
Nitroselüloz membranlar metanol ile ön ıslatma gerektirmez	PVDF membranlar metanol ile ön ıslatma gerektirir.

Özet - Nitroselüloz ve PVDF

Nitroselüloz membranlar, yanal akış deneyi için ticari olarak kullanılan ilk membranlardır. Proteinleri emmek için yüksek kapasiteye sahiptirler. Bu nedenle, batı lekelenmesinde nitroselüloz membranlar kullanılır. PVDF, batı beneklenmesinde kullanılan başka bir membran türüdür ve ayrıca yüksek protein emme kapasitesine sahiptir. Her iki tip de protein analizi için batı lekelemede kullanılır. Bununla birlikte, PVDF membranları daha özel özelliklere sahiptir, bu da onları batı lekeleme için nitroselüloz membranlardan daha uygun hale getirir. Ancak, nitroselüloz membranlar düşük moleküler ağırlıklı proteinleri tespit etmek için daha uygundur, PVDF membranları yüksek moleküler ağırlıklı proteinleri tespit etmek için daha uygundur. Bu nitroselüloz ve PVDF membranlar arasındaki farktır.

Görünüm inceliği:
1. “Western blot transfer” Bensaccount tarafından İngilizce Wikipedia (CC BY 3.0) aracılığıyla Commons Wikimedia

Referans:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun ve Thomas A. Neubert. “Matris Destekli Lazer Desorpsiyon / İyonizasyon Kütle Spektrometresi ile Protein Karakterizasyonu için Nitroselüloz Membranların Kullanımı.” Analitik Kimya. ABD Ulusal Tıp Kütüphanesi, 15 Temmuz 2006. Web. 28 Mart 2017
2. ”Moleküler İşaretleyiciler ve Bitki Biyoteknolojisi.” Google Kitapları. N.p., n.d. Ağ. 28 Mart 2017
3. 8 Nisan 2013 Pazartesi Tweet. “Membrandaki Sihir: Best Western Blot Sonuçları İçin Akıllıca Seçin.” Biocompare. N.p., 08 Nisan 2013. Web. 28 Mart 2017