PCR ve Gerçek Zamanlı PCR Arasındaki Fark

PCR ve Gerçek Zamanlı PCR

PCR veya Polimeraz zincir reaksiyonu, ilk kez 1983 yılında kimyager Kary Mullis tarafından geliştirilen modern moleküler biyolojide devrim niteliğinde bir keşiftir. Karmaşık bir DNA'daki tek bir dizinin analiz için amplifiye edilmesini sağlar. PCR'ın temel fikri, bir DNA sekansının zıt şeritlerini tamamlayıcı olan iki primerin birbirine doğru yönlendirilmesidir; primerler, her biri diğer primeri içeren tamamlayıcı lifler üretir. Dolayısıyla sonuç, iki primer arasında yer alan DNA'ya karşılık gelen büyük miktarda bir dizidir. DNA polimeraz enzimi PCR'deki primerleri uzatmak için kullanılır. DNA polimeraz, termostabil bir enzimdir ve şablon DNA'nın denatürasyonu için kullanılan yüksek sıcaklıklarda (94 ila 95 ° C) hayatta kalma yeteneğine sahiptir..

PCR üç adımdan oluşur: tekrarlanan denatürasyon turları, primerlerin tavlanması ve DNA sentezi. Bu reaksiyonu gerçekleştirmek için bir termosikler makinesi kullanılır, böylece sıcaklıkları hızlı ve doğru bir şekilde değiştirmek için programlanabilir. PCR uygulamaları kriminal araştırmalar, DNA parmak izi, patojenlerin tespiti ve erken insan türlerinin DNA'sının analizidir..

Konvansiyonel PCR nedir?

Geleneksel PCR'nin üç ana aşaması vardır; DNA amplifikasyon aşaması, PCR'nin ayrılması ve ürünlerin tespiti. DNA segmentlerinin ayrılması tipik olarak agaroz jel elektroforezi ile yapılır. Ürünler daha sonra etheiduim bromür ile boyanır. Son olarak saptama, UV ışığı altında bantların jeller üzerinde görselleştirilmesiyle gerçekleştirilir. Bu nedenle, geleneksel PCR'nin nihai sonuçları sayı olarak ifade edilmez. Normalde geleneksel PCR sadece tek bir parametreyi tespit edebilir.

Gerçek Zamanlı PCR Nedir?

Gerçek zamanlı PCR, ürünler sentezlendikçe ürünlerin amplifikasyonunu tespit edebilir. Teknolojinin gelişmesiyle, PCR özellikle gıdalardaki bakterilerin saptanması ve tanımlanması için çok popüler bir teknik haline gelmiştir. Gerçek zamanlı PCR floresan boya sistemi ve floresan algılama özelliğine sahip termosikler kullanır.

Konvansiyonel PCR ile Gerçek Zamanlı PCR arasındaki fark nedir?

• Geleneksel PCR, amplifiye PCR ürünlerini analiz etmek için jel elektroforezi kullandığı için daha fazla zaman alır. Buna karşılık, gerçek zamanlı PCR, reaksiyonun erken aşamalarında amplifikasyonları tespit edebildiğinden daha az zaman alır.

• Gerçek zamanlı PCR, PCR'nin üstel büyüme fazında veri toplarken, geleneksel PCR reaksiyonun Bitiş noktasında veri toplar.

• Geleneksel PCR'nin son nokta sonuçları çok hassas olmayabilir, ancak gerçek zamanlı PCR'nin sonuçları çok hassastır.

• Gerçek zamanlı PCR, geleneksel PCR'den daha duyarlıdır.

• Konvansiyonel PCR çok düşük çözünürlüğe sahipken, gerçek zamanlı PCR yüksek çözünürlük nedeniyle çok az değişiklik algılayabilir.

• Konvansiyonel PCR'nin son nokta tespiti kısa dinamik aralığa, gerçek zamanlı PCR tespiti geniş dinamik aralığa.

• Geleneksel PCR'den farklı olarak, gerçek zamanlı PCR'de otomatik algılama teknikleri bulunur.

• Konvansiyonel PCR oldukça karmaşıktır ve gerçek zamanlı PCR'den daha fazla emek gerektirir.

• Gerçek zamanlı PCR'den farklı olarak, geleneksel PCR ölü ve canlı bakteriler arasında ayrım yapamaz.

• Gerçek zamanlı PCR ürünleri tespit etmek için floresan boya sistemini kullanırken, geleneksel PCR agaroz jel ortamındaki bantları görselleştirmek için etidyum bromür ve UV ışığı kullanır..