SDS Sayfası ve Western Blot Arasındaki Fark

Temel Fark - SDS Sayfası ve Western Blot
 

Western blotting, bir protein örneğinden spesifik bir proteini tespit eden bir tekniktir. Bu teknik birkaç anahtar adımda gerçekleştirilir: jel elektroforezi, lekeleme ve hibridizasyon. Sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS Sayfası) proteinleri boyutlarına (moleküler ağırlıklar) göre ayırmak için kullanılan bir tür jel elektroforez tekniğidir. Western blot, SDS'deki proteinlerin aynı desenini aktarmak için kullanılan özel bir lekeleme membranı tabakasıdır. SDS Sayfası ile western blot arasındaki en önemli fark SDS Sayfası bir karışımdaki proteinlerin ayrılmasına izin verir süre western blot, bir karışımdan belirli bir proteinin saptanmasına ve ölçülmesine izin verir. Her ikisi de protein analiz çalışmalarında faydalıdır.

İÇİNDEKİLER
1. Genel Bakış ve Temel Fark
2. SDS Sayfası nedir
3. Western Blot nedir
4. Yan Yana Karşılaştırma - SDS Sayfası ve Western Blot
5. Özet

SDS Sayfası nedir?

SDS Page, protein ayrımı için kullanılan bir jel elektroforez tekniğidir. Biyokimya, genetik, adli tıp ve moleküler biyolojide yaygın olarak kullanılır. Proteinler numuneden ekstrakte edildikten sonra, SDS ve poliakrilamitten oluşan bir jel üzerinde çalıştırılırlar. SDS, proteinleri (denat proteinleri) doğrusallaştırmak ve moleküler kütleleriyle orantılı olarak doğrusallaştırılmış proteinlere negatif bir yük vermek için kullanılan anyonik bir deterjandır. Poliakrilamid jel için katı destek haline gelir. Negatif yüklü denatüre proteinler, jel yoluyla aparatın pozitif ucuna doğru göç eder. Proteinlerin boyutlarına göre, göç hızları proteinler arasında farklılık gösterir ve ayrılma meydana gelir. Bu nedenle, SDS sayfası tek tek proteinlerin boyutlarına göre ayrılmasında faydalıdır.

Proteinlerin fraksiyonlanması için poliakrilamid jelin hazırlanması SDS'de önemli bir adımdır. Poliakrilamidin doğru konsantrasyonu ve kullanılan çapraz bağlama maddesinin tipi, jelin fiziksel özelliklerini güçlü bir şekilde etkiler, bu da farklı proteinlerin gerçek ayrılmasını sağlar. Etkili ayırma için jelin gözenek boyutları uygun şekilde yönetilmelidir. Bununla birlikte, SDS Sayfası yüksek çözünürlüklü protein ayırma tekniği olarak kabul edilir.

SDS Page tekniğinin protein analizinde büyük bir sınırlaması vardır. SDS proteinleri ayrılmadan önce denatüre ettiğinden, enzimatik aktivitenin, protein bağlayıcı etkileşimlerin, protein kofaktörlerinin, vb. Saptanmasına izin vermez..

Şekil 01: SDS Sayfası

Western Blot nedir?

Western blotting tekniği, bir protein karışımından spesifik bir proteinin saptanmasını ve proteinin miktarının ve molekül ağırlığının ölçülmesini sağlar. Western blot, SDS-poliakrilamid jelindeki protein modellerinin ayna görüntüsünü elde etmek için blotlama prosedürü sırasında kullanılan membrandır. Batı beneklenmesi için kullanılan zar çoğunlukla nitroselüloz veya poliviniliden diflorürden (PVDF) oluşur. Aktarılan proteine ​​sahip membran, istenen proteini tanımlamak için kullanılabilir. Hibridizasyon yoluyla istenen proteinin saptanması için yüksek kaliteli antikor gerektirir. Antikor, spesifik antijenine bağlanır ve bir protein olan arzu edilen antijenin varlığını ortaya çıkarır.

Proteinlerin SDS poliakrilamid jelinden batı lekesine aktarılması, elektro-lekeleme ile gerçekleştirilir. Proteinlerin jelden elektroforezi almasına ve nitroselüloz membrana (batı lekesi) geçmesine neden olan etkili ve hızlı bir yöntemdir..

Resim 02: Batı Lekesi

SDS Sayfası ve Western Blot arasındaki fark nedir?

SDS Sayfası ve Western Blot
SDS Sayfası bir jel elektroforez tekniğidir.	Western blot, bir karışımdan belirli bir proteini tespit etmek için bir zar üzerinde gerçekleştirilen bir tekniktir.
kullanım
SDS sayfası proteinlerin boyutlarına göre ayrılmasını sağlar.	Western blot, modelini değiştirmeden SDS sayfa jelindeki proteinlerin transferine izin verir ve spesifik antikorlarla hibridizasyona izin verir.
Dezavantajları
Protein denatürasyonu, yüksek maliyet ve nörotoksin kimyasallarının varlığı bu tekniğin dezavantajlarıdır.	Bu teknik zaman alıcıdır ve iyi deneyimli kişisel ve özel kontrollü koşullar gerektirir.

Özet - SDS Sayfası vs Western Blot

SDS sayfası ve western blot, protein analizinde yer alan iki yöntemdir. SDS Sayfası, bir jel üzerindeki proteinlerin moleküler ağırlıklarına göre kolayca ayrılmasını sağlar. Western blot, spesifik antikorlarla hibridizasyon yoluyla spesifik bir proteinin varlığını ve miktarını doğrulamaya yardımcı olur. SDS Sayfası ile western blot arasındaki fark budur..

Referanslar:
1. Blancher, C. ve A. Jones. “SDS -PAGE ve Western Blotting Teknikleri.” Moleküler tıpta yöntemler. ABD Ulusal Tıp Kütüphanesi, n.d. Ağ. 27 Mart 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig ve David H. Petering. "Doğal SDS-PAGE: Bağlı Metal İyonları Dahil Doğal Özelliklerin Korunmasıyla Proteinlerin Yüksek Çözünürlüklü Elektroforetik Ayrılması." Metallomik: entegre biyometal bilimi. ABD Ulusal Tıp Kütüphanesi, Mayıs 2014. Web. 27 Mart 2017.

Görünüm inceliği:
1. “SDS-PAGE Elektroforez” Bensaccount tarafından İngilizce Wikipedia (CC BY 3.0) aracılığıyla Commons Wikimedia
2. “Western blot 114A” Amanthabagdon tarafından - Commons Wikimedia üzerinden kendi çalışması (Public Domain)