SDS-PAGE tekniğinin açıklanmasında istifleme jeli ve ayırma jeli terimleri kullanılır. SDS-PAGE veya sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi, protein moleküllerini moleküler ağırlıklarına göre ayırmak için kullanılan bir laboratuvar tekniğidir. Tekniğin arkasındaki teori, farklı molekül ağırlıklarına sahip proteinlerin farklı göç oranları göstermesidir; düşük moleküler ağırlıklı moleküller daha hızlı göç ederken, yüksek moleküler ağırlıklı moleküller daha yavaş göç eder. Göç ortamı bir jeldir. İstifleme jeli ve ayırma jeli olarak adlandırılan iki tip jel vardır. temel fark istifleme jeli ile ayırma jeli arasında istifleme jeli pH'ı 6.8, ayırma jeli pH'ı 8.8'dir.
1. Genel Bakış ve Temel Fark
2. İstifleme Jeli Nedir
3. ayıran jel nedir
4. İstifleme Jeli ve Ayırma Jeli Arasındaki İlişki
5. Yan Yana Karşılaştırma - Tabular Formda Ayırma Jeli vs İstifleme Jeli
6. Özet
İstifleme jeli, SDS-PAGE tekniğinde daha konsantre çözücü jelin (ayırma jeli) üstüne yerleştirilen düşük konsantre bir poliakrilamid jeldir. İstifleme jeli elektroforezin çözünürlüğünü arttırmak için kullanılır. İstifleme jeli konsantrasyonları ve örnekteki proteinler üzerinde etkili olan çözelti jeli arasındaki farktan dolayı çözünürlük artar. İstifleme jelindeki poliakrilamid konsantrasyonu düşük olduğundan, gözenek boyutu daha yüksektir. Bu ayrıca ayrılmayı artırmaya yardımcı olur.
İstifleme jeli, yaklaşık% 7 poliakrilamid büyük gözenekleri olan gevşek bir poliakrilamid jeldir. Bu gözenekler büyük protein molekülleri için önemli bir bariyer görevi görmez. Dolayısıyla bu jel, bu proteinlerin hareketliliğini biraz etkiler. Bu, proteinin hareketliliğine ve büyüklüğüne göre, iki jel arasında konsantre olarak ayrılmasını sağlar..
Resim 01: SDS-PAGE Akrilamid Jel
İstifleme jelinin pH'ı 6.8'dir. PH'ı, jelin 2 pH birimi ile çözülmesinden daha asidiktir. Bu pH daha düşük bir iyonik güç ve dolayısıyla daha yüksek bir elektriksel direnç anlamına gelir. Bu, proteinlerin jelde bulunan diğer yüklü parçacıklardan daha fazla hareketliliğini kışkırtır..
Bir SDS-PAGEtekniğin ayırma jeli veya çözücü jeli, düşük konsantre istifleme jelinin üstüne yerleştirilen yüksek derecede konsantre bir poliakrilamid jeldir. Ayırma jeli yüksek miktarda poliakrilamid (% 10) içerir. Bu jelin pH'ı, istifleme jelinden daha yüksek bir pH seviyesi olan pH = 8.8 olarak tutulur..
Resim 02: Jel Elektroforez Aparatı
Protein molekülleri ayırıcı jele ulaştığında, bu moleküllerin göçü yavaşlar çünkü ayırma jeli, protein moleküllerinin hareketi için önemli bir bariyer görevi görebilen küçük bir gözenek boyutuna sahip yüksek konsantrasyonlu bir jeldir. Bu yavaşlama, diğer proteinlerin yavaşça yakalanmasını sağlar ve iki jel arasında dar, konsantre bir bant oluşturur..
İstifleyici Jel - Ayırıcı Jel | |
İstifleme jeli, SDS-PAGE tekniğinde daha konsantre çözücü jelin (ayırma jeli) üstüne yerleştirilen düşük konsantre bir poliakrilamid jeldir.. | SDS-PAGE tekniğinin ayırıcı jeli veya çözücü jeli, düşük konsantre bir istifleme jelinin üstüne yerleştirilen yüksek derecede konsantre bir poliakrilamid jeldir.. |
Yerleştirme | |
Çözme jeli üzerine istifleme jeli yerleştirilir. | Ayırıcı jel, jel elektroforezi için kullanılan kabın tabanına yerleştirilir. |
konsantrasyon | |
İstifleme jeli konsantrasyonu yüksektir. | Ayırma jeli konsantrasyonu düşüktür. |
Poliakrilamid İçeriği | |
İstifleme jeli yaklaşık% 7 poliakrilamid içerir. | Ayırıcı jel yaklaşık% 10 poliakrilamid içerir. |
pH | |
İstifleme jelinin pH'ı 6.8'dir. | Ayırma jeli pH'ı 8.8'dir. |
Gözenek büyüklüğü | |
İstifleme jelinde büyük gözenek boyutları mevcuttur. | Ayırma jeli içinde küçük gözenek boyutları mevcuttur. |
çözüm | |
İstifleme jeli daha iyi çözünürlük sağlar. | Ayırıcı jel zayıf bir çözünürlük verir. |
İstifleme jeli ve ayırma jeli, belirli bir örnekte protein moleküllerinin daha iyi ayrılmasını sağlamak için kullanılan iki tip poliakrilamid jeldir. İstifleme jeli ile ayırma jeli arasındaki fark, istifleme jeli pH'ının 6.8, ayırma jeli pH'ının 8.8 olmasıdır..
1. “Poliakrilamid Jel Elektroforezi.” Poliakrilamid Jel Elektroforezi (Teori): Moleküler Biyoloji Sanal Laboratuvarı II: Biyoteknoloji ve Biyomedikal Mühendisliği: Amrita Vishwa Vidyapeetham Sanal Laboratuvarı. Burada mevcut
2. “SDS-PAGE Nasıl Çalışır.” Bitesize Bio, 16 Şubat 2018. Burada mevcut
3. “SDS-PAGE istifleme jeli - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew).” Google Sites. Burada mevcut
1.'SDS-PAGE Akrilamid gel'Bensaccount at English Wikipedia, (CC BY 3.0) ile Commons Wikimedia
2.'Gel elektroforez cihazı 'Jeffrey M. Vinocur tarafından - Commons Wikimedia üzerinden kendi çalışması, (CC-BY 2.5)