Klonlama ve Alt Klonlama Arasındaki Fark

Temel Fark - Klonlama ve Alt Klonlama
 

Klonlama ve Alt klonlama, ilgilenilen DNA veya geni taşıyan genetik olarak özdeş hücreler veya organizmalar oluşturan moleküler biyolojik prosedürlerdir. Klonlama, ilgili genin veya DNA'nın bir vektöre sokulmasını, bir konakçı bakteri içinde çoğaltılmasını ve genetik yapının tam kopyaları olan hücrelerin veya organizmaların üretilmesini içeren bir tekniktir. Alt klonlama, zaten bir vektöre zaten sokulmuş olan ilgili genin ikincil bir vektöre sokulmasını, bunun bir konakçı bakteri içinde çoğaltılmasını ve hücrelerin veya organizmaların genetik olarak özdeş kopyalarının üretilmesini içeren bir tekniktir. Klonlama ve alt klonlama arasındaki temel fark,, klonlamada, ilgili gen, bir vektöre bağlandığında, klonlama işlemine devam ederken, alt klonlamada, zaten klonlanmış ilgilenilen gen, ana vektörden ayrılır ve tekrar bir alıcı vektöre yerleştirilir ve işleme devam edilir..

İÇİNDEKİLER
1. Genel Bakış ve Temel Fark
2. Klonlama nedir
3. Alt Klonlama Nedir
4. Yan Yana Karşılaştırma - Klonlama ve Alt Klonlama
5. Özet

Klonlama Nedir?

Klonlama, genetik olarak özdeş organizmalar veya hücreler üreten prosedürdür. Doğada, klonlama eşeysiz üreme yoluyla olur. Genetik rekombinasyon veya değişiklik olmadığında, yavru hücreler ebeveynin aynı genetik yapısını alır. Prokaryotik ve ökaryotik organizmalar, ikili fisyon, tomurcuklanma, mitoz, vb. İle klonlar oluşturur. Moleküler biyolojide, klonlama genleri veya belirli DNA parçaları, belirli DNA bölümünün yapısını ve işlevini incelemek için popüler bir yöntemdir..

Moleküler klonlamanın temel amacı, ilgilenilen DNA parçasını (esas olarak genler) taşıyan genetik olarak aynı hücrelerin veya organizmaların milyonlarca kopyasını yapmaktır. Bir başkasının tam genetik kopyalarına sahip organizmalar oluşturur. Öncelikle, yapısal ve fonksiyonel bilgi elde etmek ve DNA sekanslaması için moleküler çalışmalarda spesifik genler klonlanır. Ayrıca, belirli proteinlerin veya ürünlerin büyük ölçekte üretimi için klonlama yaygın olarak kullanılır.

Klonlama Prosedürü

Klonlama prosedürünün temel adımları aşağıdaki gibidir.

1. İlgilenilen genin tanımlanması ve izolasyonu. (İlgilenilen genin PCR ile çoğaltılması).
2. İlgilenilen genin kısıtlama sindirimi (Kısıtlama endonükleaz geni keser).
3. Vektör DNA'nın kısıtlama sindirimi. (Vektör DNA da aynı kısıtlama endonükleaz kullanılarak kesilir).
4. Genin vektöre sokulması ve rekombinant molekülün oluşumu.
5. Rekombinant vektörün bir konakçı bakteriye dönüşümü.
6. Dönüştürülmüş bakterilerin izolasyonu ve tanımlanması (plazmid vektörü, dönüştürülebilir bakterileri taramak için en yaygın olarak bir antibiyotik direnç geni olan seçilebilir bir gen içermelidir).
7. Konakçı içinde rekombinant gen ifadesi.

Figure_01: Klonlama Prosedürü

Alt Klonlama Nedir?

Alt klonlama, genin istenen işlevselliğini elde etmek için genin ekspresyonunu görmek üzere ilgilenilen bir geni bir vektörden başka bir vektöre taşıma prosedürüdür. Bu yöntemde iki vektör söz konusudur; yani üst vektör ve hedef vektör. Klonlanmış ekler, alt klonlamada tekrar ikinci bir vektöre taşınır. Geni birinci vektörden ikinci vektöre transfer etmenin amacı, birinci vektör tarafından yapılamayan bir şeyi elde etmek veya bir geni daha önce klonlanmış DNA parçası içinde tekrar ayırmak ve tek başına ifade etmektir. Kısıtlama enzimleri bu prosedürde başlangıçta kullanılır.

Alt Klonlama Prosedürü

Alt klonlamanın temel adımları aşağıdaki gibidir.

1. Kısıtlama endonükleazlarının yardımıyla, ilgili DNA'nın donör plazmidinde ayrılması (ana vektör).
2. İlgili DNA'nın PCR kullanılarak amplifikasyonu.
3. PCR ürününün (ilgilenilen DNA) jel elektroforezi ile saflaştırılması.
4. Ana plazmiddeki ilgili DNA'yı ayırmak için kullanılan aynı kısıtlama endonükleazları ile alıcı plazmidin açılması.
5. Alt klonlanmış plazmid oluşturmak için ilgilenilen DNA'nın (gen) alıcı plazmide bağlanması.
6. Alt klonlanmış vektörün yetkin bir konakçı bakteriye dönüşümü.
7. Dönüştürülmüş hücrelerin taranması.
8. Plazmid DNA'nın saflaştırılması ve arzu edilen ürünleri elde etmek için DNA dizilemesi veya genlerin ekspresyonu için kullanım.

Alt klonlama, bir genin klonlanmış gen grubundan izole edilmesi veya ilgili genin ilgili genin tam işlevini görmek için yararlı bir plazmide aktarılması gerektiğinde gerçekleştirilir..

Figure_02: Alt Klonlama Prosedürü

Klonlama ve Alt Klonlama arasındaki fark nedir?

Klonlama ve Alt Klonlama
Klonlama, genetik olarak özdeş organizmalar veya hücreler üreten prosedürdür.	Alt klonlama, genin istenen işlevselliğini elde etmek için genin ifadesini görmek üzere ilgilenilen bir geni bir vektörden başka bir vektöre taşıma prosedürüdür..
süreç
İlgilenilen DNA'yı organizmadan ayırın ve bir kez bir vektöre sokun ve klonlayın	Zaten klonlanmış DNA, birinci vektörden ayrılır ve ikinci bir vektöre yerleştirilir ve klonlanır.
Vektörler Üzerinden Hareket Ekleme
Ekleri (ilgilenilen DNA) bir vektörden başka bir vektöre taşımaz.	Ekleri üst vektörden hedef vektörüne taşıma.

Özet - klonlama vs subklonlama

Klonlama, eklenen gen veya DNA ile ilgili olarak genetik olarak özdeş hücreler veya organizmalar oluşturur. İlgili DNA'nın bir konakçı bakteri içinde bir vektöre ve ekspresyona ayrılması ve sokulması yoluyla ilerler. Alt klonlama, klonlama ile benzer adımları paylaşır. Bununla birlikte, alt klonlamada, zaten klonlanmış DNA fragmanı (ilgilenilen gen) bir vektöre sokulur ve bir konakçı bakteriye dönüştürülür. Klonlama ve alt klonlama arasındaki temel fark budur.

Referanslar

1. Lodish, Harvey. “Plazmid Vektörlerle DNA Klonlama.” Moleküler Hücre Biyolojisi. 4. baskı. ABD Ulusal Tıp Kütüphanesi, 01 Ocak 1970. Web. 05 Mart 2017
2. “Alt-klonlanması.” Vikipedi. Wikimedia Foundation, 14 Şubat 2017. Web. 06 Mart 2017
3. “Alt-klonlanması.” Alt klonlama | Açık Erişim makaleleri | Açık Erişim dergileri | Konferans Bildirileri | Editörler | Yazarlar | Hakemler | bilimsel olaylar. N.p., n.d. Ağ. 06 Mart 2017
4. Wackerhage, Henning. "Alt klonlama nasıl yapılır." Alt klonlama nasıl yapılır. N.p., 01 Ocak 1970. Web. 06 Mart 2017

Görünüm inceliği

1. Moleküler Klonlama Prosedürü - CNX OpenStax [CC BY 4.0], Wikimedia Commons aracılığıyla
2. Alt Klonlama Prosedürü - Tarafından Orijinal yükleyici İngilizce Wikipedia'da Takometer (Vikipedi Commons aracılığıyla en.wikipedia'dan Commons'a aktarıldı.) [CC BY 2.5]